2018年33期

重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化

作  者 田顺立,郑春阳
第一作者 田顺立
作者单位 天津医科大学总医院保健医疗部,天津
卷  号 46
发表年份 2018
发表刊期 33
发表页面 71-74
关  键  字 角质细胞生长因子(KGF);原核表达系统;密码子优化;融合表达;标签蛋白,
摘  要 [目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化。[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化。使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO融合的Fh8-SUMO-KGF(ΔN23),并测试不同表达温度(37、23 ℃)对KGF(ΔN23)表达结果的影响。[结果]在BL21(DE3)菌株中,37 ℃表达时KGF(N23),SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)的表达量都较高,其中可溶性蛋白表达量KGF(ΔN23)< SUMO-KGF(ΔN23)< Fh8-SUMO- KGF(ΔN23)。降低诱导温度为23 ℃后,3种KGF的表达量都显著降低,但是可溶性蛋白的占比显著提高,均接近100%。[结论]降低诱导温度能够促进KGF的可溶性表达,但是总蛋白的表达水平显著下降;与可溶性标签蛋白融合表达能够提高KGF在37 ℃表达时可溶性蛋白占比,其中融合Fh8-SUMO标签的KGF表达量和可溶性蛋白占比较高。
附  件 重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化
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