2019年02期

ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

作  者 戴安娜,胡佳慧,屈玉杏,刘婉洋,许显玉,陈风雷
第一作者 戴安娜
作者单位 扬州大学兽医学院,江苏扬州
卷  号 47
发表年份 2019
发表刊期 2
发表页面 89-93
关  键  字 慢病毒;ERO1α;过表达;RAW264.7细胞
摘  要 [目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×106~10×106 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。
附  件 ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达
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